磷脂酶D(PLD)测试盒
测定方法: 微量法
测定规格: 100T/96S
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意 : 正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
磷脂酶D(EC3.1.4.4)即磷脂酰水解酶,是催化磷酸二酯键水解和碱基交换反应的一类酶的总称,广泛存在于高等动植物和等多种生物体中,具有参与细胞脂质代谢、信号传导、生物膜形成的抗逆境胁等生理功能。测定原理:
磷脂酶D催化水解磷脂酰末端的磷脂酰二酯键生成磷脂酸和,在氧化酶催化作用下生成甜菜碱和过氧化氢,过氧化氢在过氧化氢酶的作用下将4-氨基和重蒸酚氧化成粉红色物质,在500nm处有特征吸收峰。自备实验用品及仪器:
天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅、无水乙醇。酶液提取:
1.组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心5min,取全部上清于4℃、100000g离心30min,弃上清,取沉淀溶于1mL试剂一。
2.细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后于4℃,10000g离心5min,取全部上清于4℃、100000g离心30min,弃上清,取沉淀溶于1mL试剂一。
血清:直接测定。
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