γ-谷氨酰半连接酶(GCL)测试盒
测定方法: 微量法
测定规格: 100T/96S
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意: 正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
GCL 是 GSH 合成的限速酶,GCL基因表达受多种因素调节,如氧化剂、抗氧化剂、生长因子等。GCL活性高低对GSH含量和GSH/GSSG比值有重要影响。
测定原理:
在ATP和Mg2+存在下,GCL催化和半合成γ-谷氨酰半;同时ATP去磷酸化产生无机磷分子,通过测定无机磷增加速率,即可计算出GCL活性。
自备仪器和用品:
冷冻离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、浓硫酸和蒸馏水。
粗酶液提取:
1.组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2.按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
3.血清等液体:直接测定。
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