蛋白纯化系统的原理

上海金鹏仪器蛋白纯化系统主要利用以下几种原理进行蛋白质的分离纯化：
分子筛层析：也叫凝胶过滤层析，利用凝胶的分子筛性质，基于蛋白质分子的大小不同进行分离。凝胶颗粒内部有许多大小不一的孔隙，当蛋白质混合物流经凝胶柱时，大的蛋白质分子无法进入孔隙，只能在凝胶颗粒之间的空隙中流动，路径短，先流出层析柱；而小的蛋白质分子可以进入孔隙，在柱内停留时间长，后流出层析柱，从而实现不同大小蛋白质的分离。
亲和层析：利用生物分子间的特异性亲和能力进行分离。将与目标蛋白具有特异性结合能力的配基固定在层析柱的基质上，当含有目标蛋白的样品通过层析柱时，目标蛋白会与配基特异性结合而被吸附固定在柱中，其他杂质则直接流出。然后通过改变缓冲液的离子强度、pH 值或使用更强的配体结合溶液，使目标蛋白与配基的结合被破坏，从而将结合的蛋白质洗脱下来，获得纯化的目标蛋白。
离子交换层析：根据蛋白质表面电荷不同进行分离纯化。蛋白质是两性电解质，在不同的 pH 值环境中会带有不同的电荷。离子交换层析的固定相是由惰性琼脂糖或者高分子基质与带电基团共价结合组成，分为阴离子交换层析（固定相带正电荷，结合带负电的蛋白质）和阳离子交换层析（固定相带负电，结合带正电的蛋白质）。当蛋白质样品流经离子交换柱时，带相反电荷的蛋白质会与固定相结合，而其他电荷性质不同的蛋白质则不结合或结合较弱，先流出层析柱。通过改变缓冲液的离子强度或 pH 值，可使结合在柱上的蛋白质被洗脱下来，从而达到分离纯化的目的。