体外重组蛋白表达技术已经渗透到生物学的各个领域。目前，体外重组蛋白表达系统主要有四类：原核表达系统、哺乳动物细胞表达、酵母表达系统及昆虫细胞表达。表达的一般实验包括载体构建-表达鉴定-蛋白纯化三大步骤。在构建载体阶段，除了一些必要的表达元件，还需要考虑的密码子优化和标签的选择。选择合适的标签不但有利于蛋白的纯化，促进蛋白的可溶性，同时也不能影响蛋白的结构功能和下游应用。感谢使用上海金鹏蛋白纯化系统Blupadstart进行蛋白纯化分离实验。
本文详细介绍了几种蛋白纯化标签，帮助我们更好的设计实验。
蛋白纯化标签比较| 融合标签 | 大小（KD） | 功能 | 是否切除 |
| HIS | 0.84 | 有利纯化，能纯化可溶性/包涵体蛋白 | 标签小，对蛋白无影响 |
| GST | 26 | 增强蛋白可溶性，仅能纯化可溶性蛋白，屏蔽毒性蛋白 | 标签较大，影响较大 |
| MBP | 44.4 | 增强蛋白可溶性，屏蔽毒性蛋白 |
| NusA | 55 | 增强蛋白可溶性，屏蔽毒性蛋白 |
| SUMO | 11.2 | 增强可溶性，屏蔽毒性蛋白 |
表1：各个标签性能对比表
HIS-Tag（标签）
HIS-Tag蛋白纯化的标签HIS-Tag本身的特性对目的蛋白没有影响，不会形成二聚体；
- 分子量较小，只有0.84KD，对蛋白的下游应用不会产生影响；
- 免疫原性低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体；
- HIS-Tag与细菌的转录翻译机制兼容，有利于蛋白表达；
- 可与其他标签构建双标签表达，可用于多种蛋白表达系统，纯化条件温和对蛋白影响较小。
GST-Tag（巯基转移酶标签）GST-Tag相对分子质量较大，约为26KD，插入在目的蛋白的C末端或N末端，大肠杆菌中常用在N端。GST(巯基转移酶) 蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶。一般选择GST标签的目的有两个，一是提高蛋白表达的可溶性，二是提高蛋白的表达量。蛋白表达纯化结束后需根据不同的蛋白应用而确定是否切除标签，标签较大，切除与否需根据下游应用考虑。如果要去除GST融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。检测方法可用GST抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测。
HIS-Tag由6-10个残基组成，分子量不到0.84KD，，通常插入在目的蛋白的C末端或N末端。HIS-Tag是目前原核表达常用的标签，蛋白纯化完之后可以不需切除此标签，也不会对蛋白产生功能影响。同时，蛋白纯化步骤简便，纯化条件温和，对蛋白也不会产生太大影响。
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