测定方法: 微量法
测定规格: 100管/48样
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意: 正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
GOT( 2.6.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化可逆转氨基反应,是氨基酸代谢的重要酶。此外,GOT在心肌细胞中含量 的辅助检查。肝脏损害时其血清浓度也可升高。测定原理:
GOT催化 α-同戊二酸和天发生转氨基反应,生成和草酰乙酸,草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙酮酸;丙酮酸可与2,肼反应生成2,腙,在碱性条件下显棕红色;测定505nm吸光度的变化,即可计算GOT酶活力。
需自备的仪器和用品:
可见分光光计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。样品测定的准备:
1、细胞或组织样品的制备:培养细胞:先收集或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万或细胞加入1mL提取液),超声波破碎或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
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